色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等。 (1)硅膠純度
硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質(zhì)會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。
(2)Waters色譜柱尺寸
填料床的長度和內(nèi)徑，增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導(dǎo)致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴(kuò)散，同樣會導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑，可減少橫向擴(kuò)散，但壓力較大，對系統(tǒng)要求較高。
(3)顆粒形狀及粒徑
球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻，不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低，壓力越大。
(4)顆粒表面積
顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，相對而言高表面積對樣品具有較強(qiáng)的保留能力，更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。
(5)孔徑
顆粒的孔或腔的平均尺寸，大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時間，改善分離，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。
