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血清使用中常見問(wèn)題
  • 發(fā)布日期:2021-07-26      瀏覽次數(shù):1797
    •                                                                     血清使用中常見問(wèn)題
                                                                        檢碩科學(xué)上海有限公司

            胎牛血清、新生牛血清、小牛血清有何區(qū)別?
      胎牛血清:指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,其胎球蛋白較多,血清白蛋白含量高,而r-球蛋白含量極低甚至沒(méi)有,并富含多種生長(zhǎng)因子,是培養(yǎng)細(xì)胞zuiyou質(zhì)的血清。

      新生牛血清:指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清,其內(nèi)含多種生長(zhǎng)因子。

      小牛血清:指出生后飼養(yǎng)一定時(shí)間(一周至六個(gè)月)再采集加工而成的血清,因與外界接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng),故血清內(nèi)r-球蛋白含量較高,不利于細(xì)胞培養(yǎng),特別是不利于病毒研究與疫苗生產(chǎn)。

      1、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

      將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。  

      長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

      2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

      沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。

      3. 為什么要熱滅活血清?

      加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

      4. 有必要做熱滅活嗎?

      實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增

      5. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?

      GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預(yù)老化,儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲(chǔ)存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。

      6. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

      解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

      解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

      請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

      血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。 若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

      7、細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

      (1)盡可能地減少血清凍融次數(shù);

      (2)培養(yǎng)基無(wú)需37℃水?。?

      (3)培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0-7.2;  

      (4)嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗;  

      (5)掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

      本篇文章轉(zhuǎn)至實(shí)驗(yàn)之聲


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